一、標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)介

  在飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法（GB 8538）中，產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)一直是一個(gè)必檢項(xiàng)目。新版《GB 8538-2022 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》已于2022.6.30發(fā)布，2022.12.30正式實(shí)施。與舊版本相比，新版標(biāo)準(zhǔn)中，在產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)方法上對(duì)計(jì)數(shù)培養(yǎng)基、分離方法、確證試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法方面都有較大的變動(dòng)，本文主要對(duì)這些改動(dòng)進(jìn)行逐一說明。

二、培養(yǎng)基的改變

  舊版標(biāo)準(zhǔn)《GB 8538-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)  飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》中規(guī)定分離培養(yǎng)基采用SPS（亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂），但新標(biāo)準(zhǔn)中明確改用TSC（胰?-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂）對(duì)樣品中的產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行分離培養(yǎng)。

  有關(guān)這兩種培養(yǎng)基的異同及產(chǎn)氣莢膜梭菌在這兩種培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)等，可參考文章：兩種產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基的對(duì)比 點(diǎn)擊查看

三、分離方法的改變

  新舊版本對(duì)樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)都涉及濾膜過濾法，但新版標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)于濾膜的孔徑描述更加規(guī)范（0.45μm）。

  對(duì)于帶菌濾膜的使用，舊版標(biāo)準(zhǔn)中是直接“將濾膜移至SPS瓊脂培養(yǎng)上"，倒置培養(yǎng)；而新版標(biāo)準(zhǔn)中，除了按照舊版標(biāo)準(zhǔn)的方法將濾膜轉(zhuǎn)移到TSC培養(yǎng)基上外，還要求“傾注5mL～10mL冷卻至50℃的TSC瓊脂均勻覆蓋濾膜表面"，在分離方法的操作上相對(duì)舊版有所改變。

  兩種分離試驗(yàn)方法所取得的試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示：

圖1 產(chǎn)氣莢膜梭菌分離試驗(yàn)結(jié)果（左：舊版方法；  右：新版方法）

四、確證試驗(yàn)方法的改變

  舊版標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)可疑菌的確證試驗(yàn)方法為：鏡檢形態(tài)、動(dòng)力、硝酸鹽還原、牛奶發(fā)酵、卵磷脂分解；而新版標(biāo)準(zhǔn)中，則采用鏡檢、動(dòng)力-硝酸鹽試驗(yàn)、牛奶發(fā)酵試驗(yàn)和乳糖-明膠試驗(yàn)的方法，差異部分的試驗(yàn)結(jié)果如圖2。

  有關(guān)這些驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果現(xiàn)象等詳細(xì)信息，可參考文章：產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)解析及注意事項(xiàng) 點(diǎn)擊查看

圖2 新舊版本標(biāo)準(zhǔn)中可疑菌的確證方法試驗(yàn)結(jié)果比較

（左：舊標(biāo)準(zhǔn) 卵磷脂分解試驗(yàn)；  右：新標(biāo)準(zhǔn) 乳糖-明膠試驗(yàn)）

五、計(jì)數(shù)方法的改變

  舊版標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定“挑取可疑黑色菌落3個(gè)-5個(gè)"，進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)確證；新版標(biāo)準(zhǔn)則要求“按比例挑取10個(gè)不同形態(tài)的可疑菌落（不足10個(gè)則全挑）"進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)確證試驗(yàn)。在挑取的菌數(shù)和挑菌方法上都做了更加嚴(yán)格明確的規(guī)定。并且，新版標(biāo)準(zhǔn)還明確給出了菌數(shù)計(jì)算公式和報(bào)告方式（如圖3）。

圖3 新版標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)結(jié)果與報(bào)告的規(guī)定

六、討論

  新版標(biāo)準(zhǔn)除了在培養(yǎng)基、分離方法、確證方法和計(jì)數(shù)方法方面有所改變外，在語言描述方面也更加嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范。修訂后的版本，更貼近于食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)（如圖4）。

圖4 不同的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)程序

（左：GB 4789.13-2012    右：GB 8538-2022）

注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。